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本文介绍了ADA单克隆抗体制备的方案，分两个步骤，分别是第一阶段的动物免疫与筛选方法的建立与验证，以及第二阶段的ADA杂交瘤细胞制备。

阶段一（M1）：动物免疫与筛选方法的建立与验证

1、目标：
完成动物免疫；建立可行的筛选方法；完成鼠血清效价评估，做出GO/NO-go决定。

2、材料准备：
由z6com人生就是博生物进行酶切纯化制备 F(ab’)2

3、内容：
动物免疫：10只Balb/c小鼠, 10只SJL小鼠，6只SD大鼠分别免疫4次
ELISA测定血清效价评估：
免疫后血清效价间接ELISA检测。

4、周期：2-3个月

5、交付内容：M1阶段性报告包含免疫流程、血清效价检测数据。

阶段二（M2）： ADA杂交瘤细胞制备

1、目标：顺利获得细胞融合及筛选ADA杂交瘤细胞。

2、客户给予：同型对照IgG

3、内容：
(1)利用电融合技术将动物脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合并铺20-30块96孔培养板（融合2次）；
(2)间接ELISA筛选与F(ab’)2强阳性与同型对照抗体IgG不反应的细胞克隆；
(3)扩增、复制所有阳性克隆，收集阳性上清给予给客户检测；
(4)根据中结果确定阳性细胞株并顺利获得有限稀释法进行单克隆化；
(5)取得20-30株阳性单克隆细胞株，给予上清给客户进行测试；
(6)根据结果最终确定所需细胞株2-5株，扩增、冻存；
(7)选择1-2株细胞株进行无血清扩增培养，收集细胞上清，利用蛋白A纯化柱取得纯化抗体。

技术要求：抗体纯度＞95%；抗体效价＞10万倍稀释度；特异性识别CDR区；与亲本同型对照IgG交叉反应＜2%。

5、时程：3-4月。

6、交付内容
M2报告；
纯化单克隆抗体；
抗体发货COA文件。

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